نمايندگي ايران در سازمان يونسكو در پاريس طي نامه‌اي به مديركل آن سازمان از انتشار فيلم سيصد انتقاد کرده و خواهان عكس‌العمل قاطع يونسکو و محكوميت اقدام شرکت فيلمسازي وارنر برادرز در تهيه و نمايش فيلم مذکور شده است.
خبرگزاري رسمي ايران گزارش داده است دكتر محمدرضا دهشيري سرپرست نمايندگي دايم ايران در يونسكو در اين نامه ضمن جلب توجه مديركل يونسكو به ماهيت تحريك برانگيز و توهين آميز فيلم يادشده از وي خواسته است تا نسبت به اين موضوع واكنش مناسب نشان دهد.
داستان فيلم بحث انگيز سيصد پيرامون لشکرکشي خشايارشا شاهنشاه ايران هخامنشي به يونان است که نزديک به ۲۵ قرن پيش آتن را گشود و فتح کرد.
منتقدان سينمايي فيلم مذکور را بدور از واقعيات تاريخي و کاري تخيلي خوانده اند.